PCR, est reactionis catenae polymerase , quae addit additationem dNTP , Mg2 + , elongationis factorum et amplificationis amplificationis factorum systematis sub catalysi DNA polymerasi , parente DNA ut a template et specificis primariis ut principium extensionis , Per gradus denaturationis, annales, extensionis, etc., processus in vitro replicans filicum DNA strandi complementarium ad parentem strandi templates DNA cito et specialiter ampliare potest quamlibet scopum DNA in vitro.
1. Hot Satus PCR
Satus tempus amplificationis in conventionali PCR non est ponere machinam PC in machinam PCR, deinde programma amplificare incipit.Cum systema configurationis completur, amplificatio incipit, quae amplificationem non specialem causare potest, et hoc problema per calidum initium solvere potest.
Quid pcr initium calidum est?Post reactionem systema praeparatum, enzyme determinatio ad caliditatem caliditatem (plerumque 90°C altiorem) dimittitur, in gradu primo calefactionis reactionis vel "initium calidum", ut reducitur DNA polymerasis.Activatio exacta tempus et temperamentum a natura DNA polymerasi et incepti calidi determinatio pendent.Haec methodus maxime utitur adiectivis ut elementis, affinitatibus ligandis, vel chemicis ad inhibenda activitatis DNA polymerasis.Cum actio DNA polymerasi in cella temperiei inhibetur, technologiae calidae initium praebet magnum commodum ad parandas rationes multiplices PCR reactionis in cella temperatura sine specificitate PCR aperiendi.
2. RT-PCR
RT-PCR (transscriptio inversa PCR) ars experimentalis est transcriptionis transpositionis ex mRNA in cDNA et ea utens ad exemplum amplificationis.Processus experimentalis est totalem RNA in texturis vel cellulis extrahere primum, utere Oligo (dT) ut primario, transpositam transumptum ad synthesin cDNA adhibendum, ac deinde utere cDNA sicut exempli causa PCR amplificationis ad obtinendum scopo gene vel expressio gene deprehendendi.
3. Fluorescent quantitatis PCR
Quantitatis Fluorescentis PCR (realis temporis quantitatis PCR;RT-qPCR) refert modum addendi fluorescentis circulos ad systematis PCR reactionis, cumulum fluorescentium significationum ad monitorem totius PCR processu in tempore reali, ac tandem utendo norma curva ad quantitatem analyseos quantitatis.Communiter usus qPCR modos includunt SYBR Green I et TaqMan.
4. Nested PCR *
PCR nested ad usum duarum primariorum PCR pro duobus circumeuntis per amplificationem, et amplificatio producti secundi rotundi est scopum gene fragmentum.
Si mis- iunctio primae coniugationis primariorum (exterioris primers) facit productum non speciale ampliandum, possibilitas eiusdem regionis non specificae cognoscitur a secundo primorum coniugatione et pergens ad amplificandum valde parvum; amplificatio primariorum secundae coniugationis , auctus est specificatio PCR.Commodum unum ad duos circulos PCR faciendos adiuvat ut satis productum augeat a DNA inceptio limitata.
5. Touchdown PCR
Touchdown PCR methodus est emendandi proprietatem PCR reactionis componendo ambitum cycli PCR.
In touchdown PER, temperatura furnum primorum paucorum cyclorum ponitur paucis gradibus super maximam primariorum furnum temperatura (Tm).Superior furnum temperies amplificationem non specialem efficaciter minuere potest, sed simul, superior furnum temperatus separationem primariorum ac sequentium scopo aggravat, unde in reducta PCR cedit.In primis igitur paucis cyclis temperatura furnum per 1°C decrescere solet per cyclum ad augendum contentum scopo gene in systemate.Cum furnum temperatura ad optimam temperiem demissa, furnum temperatura reliquis cyclis servatur.
6. Dirige PCR
Directus PCR refertur ad amplificationem scopo DNA directe ex exemplari sine necessitate ad segregationem acidi nucleici et purificationis.
Duo sunt genera directorum PER:
modum directum: sume parvam quantitatem sample et adde directe ad PCR Master Mix pro PCR cognitionis;
modus crepuit: post sampling sample, adde lysate, lyse genome dimittere, sume parvam quantitatem lysedi supernatantis et adde ad PCR Master Mix, perfice PCR identitatem.Hic accessus laboris experimentalis simpliciorem reddit, manus temporis minuit, et DNA detrimentum in gradibus purificationis vitat.
7. SOE PCR
Gene splicing per aliudque extensionem PCR (SOE PCR) primariis utitur cum finibus complementariis ad faciendum PCR productos formandos catenis imbricatis, ut in subsequenti amplificatione reactionis, per extensionem catenarum imbricatarum, diversi fontes artificii in quibus fragmenta ampliantur, includuntur. scindebantque simul.Haec technologia currently duas principales applicationes directionum habet: constructionem fusionis generum;gene mutationis situs ordinatur.
8. IPCR
Inversa PCR (IPCR) primariis adversis complementariis utitur ad DNA fragmenta alia quam duo primaria amplificanda, et sequentias ignotas amplificat ex utraque parte fragmenti noti DNA.
IPCR initio destinatus est ordinem regionum ignotarum adiacentium determinare atque plerumque ad studium generum sequentium promotoris adhibitum est;chromosomatum oncogenicum ordinatio- nem, ut fusio gene, translocatio et transpositio;and viral gene integration, are also commonly used now For site-directed mutagenesis, fingere plasmidum cum optatae mutationis.
9. dPCR
Digital PCR (dPCR) ars est quantitatis absolutae moleculorum acidorum nuclei.
Nunc tres modi sunt quantitatis molecularum acidi nucleici.Photometria in absortione moleculorum acidorum nuclei fundatur;real-time fluorescens quantitatis PCR (Verum tempus PCR) in Ct valore innititur, et Ct valorem refert cyclum numerum congruentem valori fluorescentiae qui deprehendi potest;digital PCR est technologia novissima quantitatis quantitatis secundum methodum unius-moleculi PCR numerandi quantitatem acidi nucleici est methodus quantitatis absoluta.
Post tempus: Iun-13-2023